單片段無(wú)縫克隆試劑盒（克隆突變）

產(chǎn)品介紹：

1. 產(chǎn)品描述：

信勵(lì)致和®單片段無(wú)縫克隆試劑盒基于DNA序列同源性進(jìn)行片段重組，可快速將單個(gè)片段定向克隆到任意線(xiàn)性化載體中。本試劑盒含有的2×單片段無(wú)縫克隆混合液可將載體和片段的同源區(qū)域從雙鏈的3' 端進(jìn)行重組連接，最終得到的無(wú)缺口閉環(huán)質(zhì)粒可直接轉(zhuǎn)化，完成定向克隆。該試劑盒克服了酶切位點(diǎn)的限制，僅需在插入片段PCR引物5' 端引入線(xiàn)性化載體的末端序列，使得插入片段5' 端和3' 端帶有線(xiàn)性化載體兩端一致的序列（15~25 bp），即可實(shí)現(xiàn)插入片段的定向重組。重組反應(yīng)可在恒溫條件下快速進(jìn)行（50 ℃處理15 min），配合靈活的PCR 產(chǎn)物處理方式和快速轉(zhuǎn)化方法，數(shù)小時(shí)內(nèi)即可完成從DNA樣品準(zhǔn)備到重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化涂板培養(yǎng)的全部操作。

2. 產(chǎn)品特點(diǎn)：

（1）無(wú)需考慮酶切位點(diǎn)，基于序列同源性反應(yīng)15 min即可實(shí)現(xiàn)載體與片段的快速重組。

（2）插入片段的PCR產(chǎn)物正確且單一，無(wú)需純化，可直接與載體進(jìn)行重組反應(yīng)。

（3）可以選擇性進(jìn)行 5 min快速轉(zhuǎn)化 E.coli 感受態(tài)細(xì)胞。

單片段無(wú)縫克隆試劑盒（克隆突變）

使用說(shuō)明：

1. 產(chǎn)品組分：

2. 儲(chǔ)運(yùn)條件：

-25~-15℃存儲(chǔ)，有效期12個(gè)月，干冰運(yùn)輸。

3. 注意事項(xiàng)：

（1）片段擴(kuò)增用模板、引物、線(xiàn)性化載體、高保真聚合酶、感受態(tài)細(xì)胞、ddH2O需要自備。

（2）重組產(chǎn)物冰上冷卻后，可直接轉(zhuǎn)化化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞，進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí)，重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)化體積最多不應(yīng)超過(guò)所用感受態(tài)細(xì)胞體積的1/10。

（3）純化或回收的載體或目的片段品質(zhì)較差會(huì)顯著降低克隆陽(yáng)性率。

（4）菌落少時(shí)，建議轉(zhuǎn)化時(shí)適當(dāng)增加重組產(chǎn)物的量，或者增加菌液涂布量。

（5）隨著重組質(zhì)粒長(zhǎng)度的增加，克隆效率降低。